鯽魚戴氏西地西菌生長曲線繪制及藥敏試驗(yàn)結(jié)果（二）
1.3.2.3藥物敏感試驗(yàn)
用丹麥Biosense微生物生長監(jiān)測系統(tǒng)儀器進(jìn)行鑒定，鑒定板為革蘭陰性菌藥敏板，100孔，試驗(yàn)周期15 h結(jié)束后觀察結(jié)果并分析。
1.3.2.4生長曲線的測定
取-80℃保存的菌株，在超凈工作臺內(nèi)取100μL菌液，加入到液體LB試管中，30℃，150 r/min，培養(yǎng)24 h后同樣方法進(jìn)行傳代至第3代。取第三代菌液100μL，加入盛有100 mL液體LB的錐形瓶中，30℃，150 r/min條件下震蕩培養(yǎng)。設(shè)此時(shí)間為0 h，調(diào)分光光度計(jì)波長λ=600 nm。分別測定0、2、3、4、5、6、8、10、12h和16、18、20、24 h各時(shí)段所對應(yīng)的OD值。每個(gè)時(shí)段測定3個(gè)平行試樣[6]。
1.3.2.5回歸試驗(yàn)
試驗(yàn)魚選用當(dāng)年的鯽魚，購自吉林省金龍漁場。馴化7 d，選取體格健壯、規(guī)格整齊、游動(dòng)活躍平均初體重為（98±0.01）g的鯽魚120尾，隨機(jī)分為4組，1組對照組，其余3組為試驗(yàn)組。將4組魚同時(shí)放入相同水環(huán)境不同魚缸中(魚缸規(guī)格80 cm×60 cm×100 cm)。對照組每條魚注射無菌液體LB培養(yǎng)基0.5 mL，試驗(yàn)組每條魚注射30℃，培養(yǎng)6 h的含致病菌的液體LB 0.5 mL。27℃水溫下飼養(yǎng)7 d，觀察，并記錄[7-8]。從死亡的病灶部位進(jìn)行病原菌的再分離及鑒定。
2試驗(yàn)結(jié)果
2.1革蘭染色結(jié)果
顯微鏡下可以觀察到紅色，短桿狀，呈單雙排列。結(jié)果表明該菌為革蘭陰性菌。從鯽魚鰓部、肝、胰臟和腎臟等部位分離的菌株具有相同特征。
2.2生化鑒定結(jié)果
該菌與乙酸、Beta-葡二糖和葡萄糖等16項(xiàng)生化指標(biāo)反應(yīng)呈陽性，表明該菌能發(fā)酵或利用這些物質(zhì)；而與黏菌素、七葉苷和山梨醇等29項(xiàng)生化指標(biāo)反應(yīng)呈陰性。綜上所述，該菌鑒定為戴氏西地西菌，鑒定可信度為99%。
2.3藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果如表1可知該菌對亞胺培南、美洛培南和環(huán)丙沙星等高度敏感；對氨曲南和頭孢唑啉耐藥性最強(qiáng)。
表1藥敏試驗(yàn)
2.4生長曲線的測定結(jié)果
根據(jù)0、2、3、4、5、6、8、10、12、16、18、20、24 h所測的菌液的OD值結(jié)果，取每組的平均值，繪制菌株OD值隨時(shí)間變化的關(guān)系圖（如圖1）。可看出該菌株2～6 h進(jìn)入對數(shù)期，對數(shù)期時(shí)間較早，22 h后就進(jìn)入了穩(wěn)定期。
圖1菌株OD值隨時(shí)間變化的關(guān)系
2.5回歸試驗(yàn)結(jié)果
攻毒32 h后，鯽魚精神委頓，很少游動(dòng)，減食或不食，48 h后出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。試驗(yàn)結(jié)束后，試驗(yàn)組魚均出現(xiàn)不同數(shù)量的死亡，但對照組沒有任何死亡現(xiàn)象，結(jié)果如表2。死亡鯽魚主要癥狀為胸鰭和腹鰭基部及生殖口均出現(xiàn)充血現(xiàn)象。魚身出現(xiàn)不同的出血點(diǎn)及潰爛。剖檢死魚，鰓部發(fā)紅有的鰓絲發(fā)白，腸道、肝、胰、脾臟等處均出現(xiàn)充血癥狀。與之前的病魚完全吻合。根據(jù)上述革蘭染色反應(yīng)及生理生化檢驗(yàn)，得到細(xì)菌的特征與上述分離的溫和氣單胞菌的特征完全相符
表2回歸試驗(yàn)
3討論
本試驗(yàn)首次從發(fā)病鯽魚分離出戴氏西地西菌，該菌使鯽魚胸鰭和腹鰭基部及生殖口均出現(xiàn)充血現(xiàn)象。魚身出現(xiàn)不同的出血點(diǎn)及潰爛。剖檢死魚，鰓部發(fā)紅有的鰓絲發(fā)白，腸道、肝、胰、脾臟等處均出現(xiàn)充血癥狀。革蘭染色結(jié)果為紅色，是革蘭陰性菌，短桿狀大小為0.5～0.6μm×1～2μm。生化鑒定結(jié)果可知該菌與乙酸、Beta-葡二糖、L-色氨酸-AMC和葡萄糖等反應(yīng)呈陽性，表明該菌能發(fā)酵或利用這些物質(zhì)；而與黏菌素、七葉苷、山梨醇和L-阿拉伯糖反應(yīng)呈陰性。回歸試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)其死亡率達(dá)66.7%，對魚類危害嚴(yán)重。本文對其進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其對亞胺培南、美洛培南、左氧氟沙星和環(huán)丙沙星等高度敏；感，對氨曲南和頭孢唑啉耐藥性最強(qiáng)。與朱紅楠等[9]2002年在臨床檢驗(yàn)雜志發(fā)表的痰液中檢出戴氏西地西菌1例的藥敏結(jié)果相符合。
本試驗(yàn)致病菌最終鑒定為戴氏西地西菌。本文制作了它的生長曲線，為其后面的研究打下了基礎(chǔ)。并利用用全自動(dòng)微生物分析儀進(jìn)行藥敏分析，結(jié)果分離出幾種高度敏感的藥物，為減少該菌對鯽魚造成的危害提供實(shí)踐和理論基礎(chǔ)。因鯽魚感染戴氏西地西菌的發(fā)病機(jī)理及各方面的理論都不成熟，所以還需要進(jìn)行進(jìn)一步的探索。
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