不同濃度巴西蘇木素對耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌生長及抑制作用（三）
2結果
2.1菌株藥敏檢測結果
藥敏檢測結果顯示，10株CRABA對哌拉西林、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、亞胺培南、慶大霉素、阿米卡星、環丙沙星、左氧氟沙星、四環素耐藥率為100%，對多黏菌素耐藥率為0。
2.2 MIC、MBC測定結果
蘇木萃取液對10株CRABA的MIC均為15.63 mg/mL，MBC均為15.63 mg/mL。巴西蘇木素對10株CRABA的MIC均為0.500 0 mg/mL，MBC均為0.500 0 mg/mL。原蘇木素B對10株CRABA的MIC均無效。
2.3蘇木組分高效液相圖譜
DMSO的高效液相圖譜見圖1，蘇木萃取液的高效液相圖譜見圖2，巴西蘇木素的高效液相圖譜見圖3，說明蘇木萃取液中產生抑菌作用的組分為巴西蘇木素。
2.4巴西蘇木素對CRABA生長的影響
巴西蘇木素藥物濃度越大，其對CRABA的抑制生長作用越強，見圖4。
圖4巴西蘇木素對CRABA生長的影響
2.5 SDS-PAGE圖譜
隨著巴西蘇木素濃度的增大，其對CRABA的分泌蛋白抑制作用越強，見圖5。
2.6巴西蘇木素與美羅培南聯合用藥細菌生長抑制結果
美羅培南對CRABA的MIC為0.128 mg/mL，FIC指數為0.75，為相加作用，見表2、3。
3討論
近年來隨著碳青霉烯類藥物的廣泛使用，耐碳青霉烯類革蘭陰性菌感染日益突出，其中CRABA所致感染的發生率和死亡率均較高，治療難度較大。CRABA對多粘菌素B的敏感性最高，耐藥率為1.4%，但因其腎臟和神經毒性作用，臨床甚少使用。CRABA對頭孢哌酮-舒巴坦、米諾環素、左氧氟沙星和阿米卡星的耐藥率分別為33.0%、42.2%、45.5%和40.2%。對頭孢他啶、亞胺培南、美羅培南和環丙沙星等耐藥率均在50%以上。目前針對CRABA感染的治療手段非常有限，主要是頭孢哌酮-舒巴坦、喹諾酮類和氨基糖苷類藥物。因此，針對CRABA探索新型藥物已成為研究的熱點。
蘇木的主要活性成分為生物堿，研究表明其中的巴西蘇木素在抗菌中起主要作用。LANE等發現巴西蘇木素對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為14.85 mm，MIC為12.5μg/mL。SYAMSUNARNO等發現蘇木中的巴西蘇木素對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、耐萬古霉素腸球菌及其他菌種具有很強的抑制作用，MIC為4～32μg/mL。因此，本研究探討了蘇木活性成分對CRABA的體外抑菌作用，為中藥抑菌研究提供理論支持。
既往研究發現，大部分抑菌的中藥對細菌的生長和蛋白譜的表達均有影響，本試驗也獲得了相似的結果。在不同濃度巴西蘇木素作用下，CRABA的生長受到明顯抑制，細菌可溶性蛋白表達發生了明顯變化，說明巴西蘇木素對CRABA的抑菌作用可能與其影響細菌生長、蛋白質的表達有關，其機制還需要進一步研究。
目前中藥很少系統地被應用于臨床，其主要原因在于中藥對細菌的抑制作用弱于常用抗菌藥物。然而有研究表明，某些中藥與抗菌藥物聯用可以產生明顯的增效作用，因此，中藥與抗菌藥物聯用成為新的研究思路。本研究創新性地將巴西蘇木素和美羅培南進行聯合用藥試驗以觀測對CRABA的抑制作用，發現二者聯合用藥與單藥比較，抑菌效果得到了明顯增強。本研究雖然證實巴西蘇木素與美羅培南對CRABA有相加效應，但從體外抑菌試驗結果分析，巴西蘇木素與美羅培南聯合用藥要達到完全抑菌效果，巴西蘇木素藥物濃度較低時，美羅培南仍需較高濃度，如何使二者聯用發揮更好的抑菌作用，尚需進一步研究。
綜上所述，中藥抗菌具有較好的前景，貫穿于抗菌的各個環節。一方面，中藥可以直接作用于微生物本身，破壞細菌細胞壁和細胞膜的完整性改變細胞通透性、抑制細菌生物被膜的形成。另一方面，通過逆轉細菌耐藥性，促進其他藥物的殺菌作用，如抑制耐藥菌外排泵、消除耐藥質粒R。本研究不足之處在于：(1)所采用菌株數量較少，且其藥敏檢測結果相同，故10株菌所得到的結果也完全相同，雖然表明研究的重復性較好，但所得結果不能證明巴西蘇木素對耐藥性不同的CRABA都有很好的抗菌作用，其結果存在一定的偏倚，為臨床提供的幫助存在局限性。(2)未對其他抑菌機制展開研究，且僅處于體外試驗階段，不能有效評價巴西蘇木素在體內的療效。因此，未來將進一步展開試驗以探討巴西蘇木素抑菌作用的機制，為體外試驗、臨床試驗及應用提供理論依據，使巴西蘇木素的抑菌活性得到真正發揮。
不同濃度巴西蘇木素對耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌生長及抑制作用（一）
不同濃度巴西蘇木素對耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌生長及抑制作用（二）
不同濃度巴西蘇木素對耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌生長及抑制作用（三）
丹麥Biosense微生物生長動態監測系統oCelloScope是一款直接法測生長曲線的儀器。oCelloScope主要應用：
1、抗菌藥敏試驗（AST）/MIC測定：通過實時動態成像，可以動態、實時地觀察、拍照、攝像不同類型的致病菌的動態生長和測量生長曲線，并能同時計數微生物的菌落數。
2、自動監測真菌的生長和萌發過程：多孔微孔板（96孔）中實時記錄圖像來實現評估青霉菌（真菌）的生長和形態變化，給出真菌的動態生長和測量生長曲線。
3、監測孢子萌發：可自動監測孢子的萌發及孢子發芽過程。
4、追蹤微生物細胞形態變化：能夠分析和跟蹤細胞形態的變化，系統包含一種基于細菌平均長度分割提取的桿狀細菌成絲監測算法。
5、研究生物膜的非靜態動力學和形態學：用于研究真菌、細菌和生物膜的非靜態動力學和形態學。
6、食品防霉防腐的優化研究： 篩選出對各種食品敗霉菌的抗菌劑及對乳酸菌產生的化合物對真菌的抗真菌活性篩選。
7、新藥研發：開發新藥或研究如何使用多種藥物組合來抑制真菌和細菌的生長。
8、藥劑學研究：評估水溶性差的藥物的沉淀動力學，監測藥物從過飽和溶液中的沉淀隨時間的變化過程。
9、量化細胞水平的變化：超高的靈敏度，系統能夠深入了解細胞動態生長過程，因為單細胞水平的變化是量化的。
10、復雜樣品分析及微生物形態鑒別：通過內置的劃分算法，能夠自動執行單細胞分析，并在復雜樣品中區分和表征不同細胞類型的動力學。
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