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?布魯菌血培養儀結果及生長曲線特點研究

布魯菌是一種動物源性人畜共患病病原菌,可引起布魯菌病。臨床表現為多汗、反復發熱、關節痛、肝脾腫大。人類對布魯菌普遍易感。布魯菌病以皮膚接觸感染為主,是牧業人員和某些職業人群感染布魯菌的主要途徑;其次,飲用生乳和食入污染布魯菌的食物而發生消化道傳染。臨床布魯菌主要分離自血液,由于此菌臨床分離較少,關于該菌在Bact/Alert血培養儀上生長曲線特點的研究極少見。


本院于2011年4月—2013年1月從15例患者血液中分離出15株布魯菌,通過觀察布魯菌在Bact/Alert血培養儀上生長曲線特點,可幫助我們預測該菌株生長,協助臨床快速診斷布魯菌病。實驗室對布魯菌病的診斷有重要作用,從發熱布魯菌病患者的血液中或慢性感染患者的組織(如骨髓)中分離布魯菌是診斷該病的金標準。

結果


絕大多數細菌是以二分裂方式繁殖,所以可以將生長和繁殖的整個過程分為遲緩期、對數生長期和穩定期。繁殖速度快的菌種一般遲緩期較短,繁殖速度慢的菌種一般遲緩期較長。圖1a為本實驗室培養出金葡菌生長曲線,葡萄球菌屬細菌生長期曲線有一定的傾斜可見遲緩期、對數生長期及穩定期3個階段,生長期曲線角度較大;圖1b是本實驗室培養出布魯菌生長曲線,布魯菌遲緩期曲線較平坦,3 d左右陽性報警,生長期曲線短,穩定期曲線平坦;圖1c是本實驗室培養出大腸埃希菌生長曲線,腸桿菌科細菌遲緩期較短,生長期生長迅速,甚至無穩定期。

圖1血培養葡萄球菌、布魯菌、腸桿菌科細菌生長曲線


討論


布魯菌的生長曲線不同于腸桿菌科細菌、葡萄球菌,與不發酵糖革蘭陰性桿菌生長曲線相同。李新等[6]報道,不發酵糖革蘭陰性桿菌在血培養儀上生長曲線的特點是:生長期所對應的縱軸較短,遲緩期和穩定期曲線較平坦,陽性報警時間均值18.8 h。陳日榮等[7]觀察腸桿菌科細菌、葡萄球菌、不發酵糖革蘭陰性桿菌、鏈球菌屬細菌、腸球菌屬細菌及真菌的生長曲線,結果與李新等報道的相同,陽性報警時間均小于24 h。本院分離的15株布魯菌在Bact/Alert 3D血培養儀上的生長曲線與不發酵糖革蘭陰性桿菌的特點相同,陽性報警時間均值63.9 h,只有1株菌在36 h出現生長期,較其他14株菌生長期出現早。由此可見布魯菌的生長曲線特點雖然與不發酵糖革蘭陰性桿菌相同,但陽性報警時間較晚。有研究表明,在布魯菌流行地區使用血培養儀監測系統,大部分布魯菌在3 d內可獲得陽性結果[8]。內蒙古自治區是布魯菌病流行地區,本研究中15株布魯菌均在3 d左右檢出。如出現上述生長曲線時,應高度懷疑為布魯菌,后續的操作都應在生物安全柜中進行,轉種的平皿要延長培養時間,因大多數布魯菌在血平皿及巧克力平皿上需要48~72 h以上才能生長出肉眼可見的菌落。注射器抽取血培養瓶中液體直接進行尿素水解試驗,結合涂片革蘭染色細菌形態特點或柯氏染色可以提示布魯菌生長,比從平皿選取菌落進行上述試驗提前24~48 h。


用布魯菌診斷血清即可確定布魯菌,但不能鑒定到種。在選用治療藥物時可根據鑒定到屬的結果。鑒定到種和生物型水平有助于流行病學研究。通常不推薦進行布魯菌藥物敏感試驗,大多數布魯菌病治療失敗并非由于細菌耐藥。


布魯菌侵襲力較強,可以通過黏膜、完整皮膚、呼吸道感染人類,在體內有很強的繁殖和擴散能力。由于布魯菌對人有極強的致病力,常可導致實驗室獲得性感染,被認為是潛在的生物恐怖病原菌,氣溶膠是實驗室獲得性感染的主要原因。實驗室感染可能與未在生物安全柜內處理陽性血培養標本有關。國外文獻有實驗室暴發感染的相關報道。我國近年也有實驗室感染布魯菌的相關報道。因此,必須嚴格遵守實驗室安全操作規程,處理感染性材料時,特別是處理布魯菌等具有高度傳染性的標本時,需要在3級生物安全防護下進行操作。實驗室工作者應認識到氣溶膠傳播的危險,適當使用生物安全防護,降低實驗室獲得性感染的風險。


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