沼澤紅假單胞菌R1菌株的培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)條件、生長量及影響因素（一）
2.1.3沼澤紅假單胞菌R1培養(yǎng)基的優(yōu)化
以甘油為碳源，氯化銨為氮源，磷酸氫二鉀為磷源，添加微量元素溶液、維生素溶液，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)L16（45），試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1，其培養(yǎng)基優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2可知，對沼澤紅假單胞菌R1的生長的影響因素為C＞B＞D＞A＞E，因素C磷源磷酸氫二鉀為主要影響因素，其它依次為因素B氮源氯化銨、因素D復(fù)合微量元素、因素A碳源甘油、因素E復(fù)合維生素。其適宜的培養(yǎng)基配方為A2B2C3D1E3，即甘油1.0 g、氯化銨1.0 g、磷酸氫二鉀0.3 g、微量元素溶液0.05 ml、維生素溶液0.15 ml、蒸餾水1 000 ml。
2.2沼澤紅假單胞菌R1培養(yǎng)條件的優(yōu)化
2.2.1接種量對沼澤紅假單胞菌R1生長的影響
沼澤紅假單胞菌R1分別按照體積比的2%、4%、6%、8%、10%接入液體菌種于優(yōu)化后的培養(yǎng)基200 ml中，于30℃、40 W白熾燈距離20 cm處下靜置培養(yǎng)72 h，結(jié)果見圖3。由圖3可知，隨著接種量的增加，沼澤紅假單胞菌R1菌數(shù)OD660值不斷增加，當(dāng)接種量為6%時達(dá)到最大值，再加大接種量則OD660值呈現(xiàn)逐步下降趨勢，分析原因可能為隨著接入沼澤紅假單胞菌菌數(shù)的增加造成培養(yǎng)基營養(yǎng)的匱乏造成的，其適宜的接種量為6%（V/V）。
圖3不同接種量對沼澤紅假單胞菌R1生長的影響
2.2.2初始pH值對沼澤紅假單胞菌R1生長的影響
分別調(diào)整優(yōu)化后的培養(yǎng)基初始pH值至5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，滅菌冷卻后，接入6%的沼澤紅假單胞菌R1液體菌種，于30℃、40 W白熾燈距離20 cm處照射靜置培養(yǎng)72 h，結(jié)果見圖4。由圖4可知，沼澤紅假單胞菌R1較適宜的pH值范圍為6.0～8.0，pH值7.0時達(dá)到最大值，偏酸、偏堿均不利于其生長。
圖4不同pH值對沼澤紅假單胞菌R1生長的影響
2.2.3溫度對沼澤紅假單胞菌R1生長的影響
將優(yōu)化后的培養(yǎng)基初始pH值調(diào)整為7.0，滅菌冷卻后，接入6%的沼澤紅假單胞菌R1液體菌種，分別置于培養(yǎng)溫度25、30、35、40℃，40 W白熾燈距離20 cm處靜置培養(yǎng)72 h，結(jié)果見圖5。由圖5可知，沼澤紅假單胞菌R1在設(shè)置的溫度下均能生長，較適宜的培養(yǎng)溫度為30～35℃，30℃時達(dá)到最大值，40℃時菌數(shù)OD660值下降較多。
2.2.4光照強(qiáng)度對沼澤紅假單胞菌R1生長的影響
將優(yōu)化后的培養(yǎng)基初始調(diào)整為pH值7.0，滅菌冷卻后，接入6%的沼澤紅假單胞菌R1液體菌種，30℃，分別置于25、40、60、100 W白熾燈下距離20 cm處照射靜置培養(yǎng)72 h，結(jié)果見圖6。由圖6可知，較適宜的為40 W白熾燈下照射，隨著白熾燈功率W的增大，菌數(shù)OD660值明顯下降，分析原因可能為沼澤紅假單胞菌R1不需要較強(qiáng)的光照強(qiáng)度。
圖5不同溫度對沼澤紅假單胞菌R1生長的影響
圖6不同光照強(qiáng)度對沼澤紅假單胞菌R1生長的影響
2.2.5裝液量對沼澤紅假單胞菌R1生長的影響
初始pH值7.0，具塞磨口250 ml三角瓶中分別裝入優(yōu)化后液體培養(yǎng)基50、100、150、200 ml，滅菌冷卻后，接入6%的沼澤紅假單胞菌R1液體菌種，30℃、置于40 W白熾燈下距離20 cm處照射靜置培養(yǎng)72 h，結(jié)果見圖7。由圖7可知，250 ml三角瓶中裝入50 ml液體培養(yǎng)基中測定的菌數(shù)OD660值最大，隨著裝液量的增加，菌數(shù)OD660值呈下降趨勢。分析原因可能為在少量氧氣存在的情況下，沼澤紅假單胞菌R1生長更好一些，少量氧氣可以促進(jìn)沼澤紅假單胞菌R1的生長。
圖7不同裝液量對沼澤紅假單胞菌R1生長的影響
2.2.6最佳培養(yǎng)條件的確定
優(yōu)化后的液體培養(yǎng)基調(diào)整初始pH值7.0，250 ml三角瓶中裝入50 ml培養(yǎng)基，接種量為6%（V/V），30℃、置于40 W白熾燈下距離20 cm處照射靜置培養(yǎng)7 d，沼澤紅假單胞菌R1菌數(shù)OD660值可達(dá)2.066，經(jīng)雙層平板計(jì)數(shù)法檢測沼澤紅假單胞菌R1菌數(shù)可達(dá)5.6×108個/ml。
3結(jié)論
①根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際需要，經(jīng)優(yōu)化后沼澤紅假單胞菌R1其適宜的培養(yǎng)基配方為：甘油1.0 g、氯化銨1.0 g、磷酸氫二鉀0.3 g、微量元素溶液0.05 ml、維生素溶液0.15 ml、蒸餾水1 000 ml。
②經(jīng)優(yōu)化后沼澤紅假單胞菌R1其適宜的培養(yǎng)條件為：初始pH值7.0、培養(yǎng)溫度30℃、接種量為6%、裝液量為液體培養(yǎng)基50 ml/250 ml三角瓶、40 W白熾燈下距離20 cm處照射靜置培養(yǎng)。
③采取以上適宜的培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)，沼澤紅假單胞菌R1菌數(shù)OD660值可達(dá)2.066，經(jīng)雙層平板計(jì)數(shù)法檢測沼澤紅假單胞菌R1菌數(shù)可達(dá)5.6×108個/ml。
沼澤紅假單胞菌R1菌株的培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)條件、生長量及影響因素（一）
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