蒼鷺養(yǎng)殖如何控制沙門菌病？用什么藥好【藥敏試驗二】
1.2.7試驗動物剖檢及細(xì)菌分離
小鼠攻毒之后注意觀察其精神狀態(tài)和死亡情況，待小鼠死亡后，采用常規(guī)剖檢方法先將小鼠腹腔打開，再打開胸腔，觀察各個臟器的病理變化，摘下肝臟以備分離細(xì)菌所用，待剖檢后，進(jìn)行細(xì)菌分離操作，以上操作都要求無菌。
1.2.8致病菌的鑒定
從死亡小鼠肝臟分離的細(xì)菌進(jìn)行革蘭染色鏡檢，對比從原始病料中分離的細(xì)菌，最終確定是否是主要致病菌。
1.2.9生化鑒定
通過純培養(yǎng)的細(xì)菌選擇典型菌落接種于8%兔鮮血瓊脂固體試管斜面培養(yǎng)基上置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～24h，用鉤菌環(huán)挑選典型單個菌落接種于微量生化鑒定管中，接種完后，微量生化管放于滅菌平皿中切忌要保持水平放置，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24～48h，進(jìn)行觀察，記錄結(jié)果。
1.2.10藥敏試驗
采用瓊脂紙片擴增法，用高壓滅菌后的棉拭子蘸取擴大培養(yǎng)后的菌液均勻涂布于8%兔鮮血瓊脂培養(yǎng)基上，為了保證涂布均勻，需要重復(fù)涂布3次，待水分干后，貼上藥敏紙片，輕輕按壓，確保其貼穩(wěn)，防止掉落和移動，注意用鑷子夾取藥敏紙片貼于平板上時要確保藥敏紙片完全與培養(yǎng)基接觸，以免影響藥物擴散不均勻。一個平皿貼7片紙片，最中間一塊，其余6塊均勻分布其周圍。貼好藥敏紙片后放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)12～24h，觀察測量抑菌圈的大小，抑菌圈≧20mm為極度敏感；15～20mm為高度敏感；14～10mm為中度敏感；10mm以下大于0為低度敏感；等于0為不敏感。藥敏試驗操作方法按2005年版CLSI／NCCLS M100－S15所述方法進(jìn)行。
2試驗結(jié)果
2.1病原菌的鑒定
從蒼鷺肝臟分離的細(xì)菌在8%兔鮮血瓊脂培養(yǎng)基上置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)12～24h，生長菌落形態(tài)都為邊緣整齊、光滑、濕潤、半透明、略隆起的細(xì)小圓形菌落，沒有出現(xiàn)溶血環(huán)；S.S.瓊脂培養(yǎng)基上細(xì)菌生長良好，長成半透明、圓形、菌落中間有黑點的小菌落；在麥康凱培養(yǎng)基上都長出半透明、光滑小菌落，挑取典型菌落進(jìn)行革蘭染色，結(jié)果為革蘭陰性菌，形態(tài)都為長桿狀或短桿狀菌落，多數(shù)散在。通過細(xì)菌形態(tài)觀察、染色鏡檢及生化鑒定結(jié)果最終得出該細(xì)菌為沙門菌。
2.2試驗動物攻毒
將細(xì)菌擴大培養(yǎng)物對小鼠進(jìn)行腹腔注射后，小鼠全部在12h之內(nèi)死亡，表中死亡時間為2只小鼠平均死亡時間，具體結(jié)果見表1。
表1動物攻毒試驗
2.3試驗動物病理剖檢及致病菌鑒定
通過對死亡小鼠進(jìn)行病理剖檢均發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟腫大、壞死，心外膜少量點狀出血，腸道黏膜嚴(yán)重出血，腸壁變薄、變黃，臌氣。剖檢完死亡小鼠取下其肝臟進(jìn)行細(xì)菌分離，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，挑取單個菌落進(jìn)行革染色再鏡檢觀察，發(fā)現(xiàn)菌落形態(tài)大小、色澤都和原分離菌一致，鏡檢也發(fā)現(xiàn)和原分離菌的形態(tài)相同，因此得出原分離細(xì)菌為該病例主要致病菌。
2.4生化鑒定結(jié)果見表2。
2.5藥敏試驗結(jié)果見表3。
表2生化鑒定
表3藥敏試驗
3討論
沙門菌病和大腸桿菌病屬于條件致病菌，人和動物的沙門菌病一直是一個世界性問題，沙門菌菌型繁多，分布廣泛，是一種重要的人畜共患病的病原體。沙門菌對于我國畜牧業(yè)的威脅越來越大，而且沒有很好的有效控制辦法，長期以來，以治療、預(yù)防疾病和促進(jìn)畜禽生長為目的，不合理使用抗生素，導(dǎo)致抗生素過度使用或濫用，在抗生素的選擇性壓力下，沙門菌耐藥性不斷上升，這已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。沙門菌耐藥的生化反應(yīng)機制主要有5種：酶對抗菌藥物的修飾或破壞；外輸泵介導(dǎo)抗菌藥物的主動外排；抗菌藥物的滲透障礙，導(dǎo)致藥物攝取減少；藥物作用靶位的改變；建立新代謝途徑，沙門菌發(fā)生耐藥性常常不是一種生化反應(yīng)機制起作用，而是兩個或多個不同的生化反應(yīng)機制共同作用。從而可以看出，要解決沙門菌的耐藥性問題面臨非常嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。
本試驗分離到的沙門菌可能是由于種蛋帶毒或者是由于野生放養(yǎng)于沼澤地而感染沙門菌，鑒于這種可能性，必須對種蛋和沼澤地的泥水進(jìn)行檢測，鑒于我國國情，在生產(chǎn)中常用國標(biāo)法，有條件的單位應(yīng)用自動酶標(biāo)檢測儀，ELISA，PCR試劑盒檢測，做到從源頭消滅病原菌，才能更好地控制沙門菌病。蒼鷺養(yǎng)殖屬于特種經(jīng)濟動物養(yǎng)殖，養(yǎng)殖規(guī)模小，養(yǎng)殖戶數(shù)量少，可以借鑒的經(jīng)驗更是很少，很多經(jīng)驗都是靠養(yǎng)殖戶自己摸索，這無疑會走很多彎路，本試驗得出的一些數(shù)據(jù)可能對于蒼鷺養(yǎng)殖能起到一個參考作用。
鑒于本試驗得出的結(jié)論，對該病例的治療與預(yù)防提出以下建議措施：用環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、甲氧芐啶進(jìn)行交替使用拌料和飲水，使用多維、中草藥等增強免疫力的藥物進(jìn)行輔助治療；盡量減小養(yǎng)殖密度，保持空氣流通；對于投喂的魚粉飼料要進(jìn)行把關(guān)檢測，防治霉變及病菌污染。
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