鯽魚戴氏西地西菌生長(zhǎng)曲線繪制及藥敏試驗(yàn)結(jié)果（一）
摘要：本試驗(yàn)旨在從患病鯽魚的鰓、腎、肝、胰臟等病灶部位分離病原菌，并對(duì)其進(jìn)行鑒定。采用革蘭染色的方法觀察其為短桿狀、呈單雙排列的革蘭陰性菌，利用丹麥Biosense生產(chǎn)的全自動(dòng)微生物生長(zhǎng)分析儀進(jìn)行生化鑒定及藥敏試驗(yàn)分析，結(jié)果為戴氏西地西菌，對(duì)亞胺培南、美洛培南、左氧氟沙星和環(huán)丙沙星等高度敏感；對(duì)氨曲南和頭孢唑啉耐藥性最強(qiáng)。并繪制了此菌的生長(zhǎng)曲線，發(fā)現(xiàn)2～6 h進(jìn)入對(duì)數(shù)期，對(duì)數(shù)期時(shí)間較早，22 h后就進(jìn)入了穩(wěn)定期。后進(jìn)行回歸試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)死亡率為66.7%，危害較大。因魚類中發(fā)現(xiàn)戴氏西地西菌較少，所以本文對(duì)于魚類戴氏西地西菌的研究有重要意義。
戴氏西地西菌屬西地西菌屬，還包括奈氏西地西菌和拉氏西地西菌。戴氏西地西菌為革蘭陰性桿菌，大小為0.5～0.6μm×1～2μm，大多數(shù)菌株能運(yùn)動(dòng)，兼性厭氧。是一種條件致病菌，被從人類的尿液、膽汁、痰和血液中檢出，但是魚類中很少發(fā)現(xiàn)[1-3]。2011年熊祝嘉等[4]從患者尿液中檢測(cè)出戴氏西地西菌一例，可導(dǎo)致泌尿系感染，而造成間斷躁動(dòng)6年，加重伴喘憋，呼吸困難等現(xiàn)象。Sevki Kayis等對(duì)土耳其-黑海區(qū)南方學(xué)院的虹鱒魚細(xì)菌進(jìn)行調(diào)查，春天和夏天都各分離出了
1株戴氏西地西菌，其存在部位有腎臟、脾臟和肝、胰臟，這也證實(shí)了魚里面有戴氏西地西菌。本試驗(yàn)從患病鯽魚中分離到1株戴氏西地西菌，進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，篩選了防治藥物，為預(yù)防和治療戴氏西地西菌引起的鯽魚類疾病提供了一定的參考依據(jù)。
1、材料與方法
1.1材料
試驗(yàn)魚，購自吉林省某漁場(chǎng)，鯽魚出現(xiàn)鰓出血，胸鰭和腹鰭基部及生殖口均出現(xiàn)充血，魚身出現(xiàn)不同的出血點(diǎn)及潰爛。剖檢死魚，發(fā)現(xiàn)鰓部發(fā)紅且有的鰓絲發(fā)白，腸道、肝胰臟、脾臟等處均出現(xiàn)充血癥狀。
1.2試驗(yàn)儀器及試劑
150G全溫振蕩培養(yǎng)箱、立式壓力蒸汽滅菌器、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、超凈工作臺(tái)、722N可見分光光度計(jì)、革蘭染色試劑盒、丹麥Biosense自動(dòng)細(xì)菌鑒定/藥敏檢測(cè)系統(tǒng)、4℃冰箱、微量移液器、試管、直徑90 mm平皿、醫(yī)用1 mL注射器、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基、生理鹽水。
1.3方法
1.3.1病原菌的分離
無菌的超凈工作臺(tái)剖檢患病鯽魚，取其鰓、肝、胰臟和腎臟等病灶部位，制成勻漿。將勻漿稀釋成不同濃度，微量移液器取200μL勻漿涂布到麥康凱瓊脂平板上，30℃培養(yǎng)24 h后觀察菌落生長(zhǎng)狀態(tài)。挑取優(yōu)勢(shì)菌群劃線純培養(yǎng)，待菌落形態(tài)生長(zhǎng)一致，挑取單菌落用80%甘油進(jìn)行保藏。
1.3.2病原菌的鑒定
1.3.2.1革蘭染色法
無菌條件下潔凈的載玻片滴少許生理鹽水，用接菌環(huán)將分離純化后的菌株均勻的涂布到載玻片上，干燥固定，后用結(jié)晶紫染液初染、碘液媒染、酒精脫色、番紅染液復(fù)染后鏡檢。
1.3.2.2生化鑒定
用丹麥Biosense微生物生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)儀器進(jìn)行鑒定，鑒定板為革蘭陰性菌鑒定板，96孔，試驗(yàn)周期15 h結(jié)束后觀察結(jié)果并分析。
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