紅螯螯蝦源布氏檸檬酸桿菌分離鑒定和耐藥性分析（三）
2.3細(xì)菌耐藥性試驗(yàn)
結(jié)果如表2所示，分離菌株對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗菌藥苯唑西林、哌拉西林、頭孢唑林、頭孢哌酮和頭孢他啶耐藥，對(duì)頭孢曲松中介;對(duì)碳青霉烯類抗菌藥亞胺培南耐藥;對(duì)喹諾酮類抗菌藥諾氟沙星敏感，對(duì)氧氟沙星和環(huán)丙沙星中介;對(duì)酰氨醇類抗菌藥氯霉素敏感，對(duì)氟苯尼考中介;對(duì)多肽類抗菌藥萬古霉素耐藥，對(duì)多黏菌素B中介;對(duì)磺胺類抗菌藥復(fù)方新諾明耐藥;對(duì)林可霉素類抗菌藥克林霉素和林可霉素耐藥;對(duì)四環(huán)素類抗菌藥四環(huán)素耐藥，對(duì)米諾環(huán)素中介，對(duì)多西環(huán)素敏感;對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥紅霉素耐藥;對(duì)氨基糖苷類抗菌藥卡那霉素耐藥，對(duì)鏈霉素中介，對(duì)阿米卡星和慶大霉素敏感。
表2分離菌株171215-10的耐藥性分析
3討論
紅螯螯蝦(Cheraxquadricarinatus)又名澳洲淡水龍蝦，因其肉質(zhì)細(xì)膩、味道鮮美被廣泛傳播到世界各地，我國(guó)于1992年首次將其引進(jìn)湖北省試養(yǎng)，并逐漸向全國(guó)推廣。紅螯螯蝦的商業(yè)需求不斷增長(zhǎng)，但養(yǎng)殖產(chǎn)量卻不見增加，這主要是由于種苗培育技術(shù)和病害防治等方面的研究不夠深入，同時(shí)這也成為紅螯螯蝦養(yǎng)殖可持續(xù)發(fā)展的技術(shù)瓶頸。本試驗(yàn)從紅螯螯蝦腸道內(nèi)分離到革蘭陰性菌株171215-10，其生化特征與Brenner等發(fā)現(xiàn)的布氏檸檬酸桿菌基本吻合，可初步鑒定該菌株為布氏檸檬酸桿菌。采用16S rDNA序列進(jìn)行同源性比較，經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)化樹分析，分離菌株171215-10與Citrobacterbraakii聚為一支，因此可將菌株171215-10鑒定為布氏檸檬酸桿菌(Citrobacterbraakii)。人工感染斑馬魚試驗(yàn)結(jié)果顯示，該分離菌株具有較強(qiáng)的致病性，1.5×108CFU/mL組可致斑馬魚在2 d內(nèi)100%死亡，累計(jì)存活率為0%，且人工感染斑馬魚分離得到的細(xì)菌與原感染菌的形態(tài)和生化特征一致。
布氏檸檬酸桿菌最早由Brenner等鑒定，為檸檬酸桿菌屬中的條件性致病菌。當(dāng)有基礎(chǔ)性疾病的患者同時(shí)感染布氏檸檬酸桿菌時(shí)，通常治療難度會(huì)增加。Tollkuci等研究發(fā)現(xiàn)，1名造血干細(xì)胞移植患者因發(fā)生了布氏檸檬酸桿菌引起的血液感染(Centralline-associated blood stream infection，CLABSI)。Seo等報(bào)道顯示，1名白血病患者因感染布氏檸檬酸桿菌而引起休克。Oyeka等報(bào)告了1名多病癥患者因感染布氏檸檬酸桿菌而出現(xiàn)組織炎和胸腔積液癥狀，最終治療無效而死亡。此外，研究人員已從多種水生生物中分離鑒定出布氏檸檬酸桿菌，如鯰魚(Ictaluruspunctatus)、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)、彩虹魚(MelanotaeniaPraecox)、鮐魚(Pneumatophorusjaponicus)和青魚(Mylopharyngodonpiceus)等。而本試驗(yàn)從紅螯螯蝦腸道內(nèi)分離出布氏檸檬酸桿菌，這在此前的研究中尚未發(fā)現(xiàn)。布氏檸檬酸桿菌為人獸共患病原菌，嚴(yán)重感染時(shí)可致宿主死亡，應(yīng)引起重視。
本藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果顯示，布氏檸檬酸桿菌171215-10僅對(duì)25種抗菌藥中的5種藥物敏感，包括諾氟沙星、氯霉素、多西環(huán)素、阿米卡星和慶大霉素。不同魚體內(nèi)分離得到的布氏檸檬酸桿菌對(duì)抗菌藥的耐藥性不同，可能與宿主來源和環(huán)境差異有關(guān)。此外，本藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，布氏檸檬酸桿菌171215-10對(duì)碳青霉烯類抗菌藥高度耐藥，這一發(fā)現(xiàn)在布氏檸檬酸桿菌的研究中已多次被驗(yàn)證，Yao等的研究檢測(cè)出10株布氏檸檬酸桿菌有碳青霉烯耐藥基因KPC-2，Dong等首次對(duì)產(chǎn)KPC-2碳青霉烯酶布氏檸檬酸桿菌進(jìn)行質(zhì)粒回收，這些報(bào)道均表明布氏檸檬酸桿菌有可能成為環(huán)境中碳青霉烯類抗菌藥耐藥性的潛在傳播者。多黏菌素B是對(duì)抗產(chǎn)生碳青霉烯酶的多重耐藥性革蘭陰性菌的重要抗菌藥，本藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果中，多黏菌素B對(duì)布氏檸檬酸桿菌171215-10為中介。此外，據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告《水產(chǎn)養(yǎng)殖用藥明白紙》顯示，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中已禁止使用諾氟沙星和氯霉素，本試驗(yàn)中對(duì)布氏檸檬酸桿菌171215-10敏感的防控藥物也將越來越少。因此，在水產(chǎn)動(dòng)物病害防治中應(yīng)及時(shí)進(jìn)行病原分離和藥敏試驗(yàn)，以科學(xué)且有針對(duì)性地進(jìn)行治療。
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