Ia型和III型無乳鏈球菌生長特性差異性比較
根據莢膜多糖的類型,無乳鏈球菌分為10種不同的血清型(Ia、Ib、II-IX型),其中Ia型和III型是無乳鏈球菌感染人、牛和魚的主要血清型。目前對于不同血清型無乳鏈球菌間生物學特性差異分析的報道還很缺乏。本實驗對兩株血清型分別為Ia型和III型的齊口裂腹魚源無乳鏈球菌在生長特性、生理生化特性進行差異性比較,為探究該病原菌不同血清型的致病機制提供實驗依據。
1、實驗條件設定
1.1兩株菌體外生長曲線的測定用BHI液體培養基將兩種細菌的菌液OD600nm值調整一致后分別接種于BHI液體培養基中28℃、180 r/min培養,每隔2 h取樣,測定其OD600nm值,直至OD600nm值不再增長為止,繪制兩株菌的體外生長曲線。
1.2溫度、pH值、鹽濃度對兩株菌生長的影響在BHI液體培養基中接入等量兩株菌的菌液,分別在24℃、28℃、32℃和37℃,pH為5.0、6.0、7.0、8.0和9.0,氯化鈉濃度為0、0.5%、1%、2%、4%和8%條件下180 r/min震蕩培養,每隔4 h取樣測定兩種菌菌液OD600nm值,分別繪制溫度、pH、鹽濃度對兩株菌生長影響的生長曲線。
2、結果
2.1兩株菌的生理生化特性的測定VITEK 2 COMPACT 30全自動細菌分析系統檢測和補充生化試驗結果見表1,結果表明S03株和S07株在生理生化特性上表現出明顯差異,S07株相對于S03株缺乏利用多種糖類、代謝酶的能力。
表1 S03和S07株S.agalactiae的生化試驗結果
2.2兩株菌體外生長曲線的測定血清III型S03株和Ia型S07株的生長曲線顯示,S03株的對數期在6 h~18 h,20 h以后進入穩定期;S07株的對數期在20 h~42 h,46 h以后進入穩定期(圖1)。表明,S03株的生長明顯快于S07株,而且S03株的OD600nm最大值約是S07株的2倍。
圖1 S03株和S07株的生長曲線
2.3溫度、pH和鹽濃度對兩株菌生長的影響
溫度對S03株和S07株影響的生長曲線顯示,以28℃時的生長曲線為參考,S03株和S07株在32℃和24℃時其生長受溫度影響的趨勢相對一致,而S03株在37℃時生長速度較快,S07株在37℃時不生長(圖2)。表明S03株對溫度的耐受能力強于S07株。
pH對S03株和S07株影響的生長曲線顯示,以在pH7.0時的生長曲線為參考,S03株和S07株在pH6.0、pH8.0和pH9.0時變化基本一致,而在pH5.0時,S03株的生長受其影響程度要小于S07株(圖3)。表明S03株對pH的耐受能力強于S07株。
鹽度對S03株和S07株影響的生長曲線顯示,以鹽度為0時生長曲線為參考,在鹽度分別為0.5%、1%、和8%時S03株和S07株生長曲線變化趨勢基本一致,但在鹽度為2%時,S03株生長受其影響較小,S07株生長則明顯受到抑制,而且在鹽度為4%時,S03株能夠生長但S07株不能生長(圖4)。表明S03株對鹽濃度耐受能力強于S07株。
圖2溫度對S03株和S07株生長影響的生長曲線
圖3 pH對S03株和S07株生長影響的生長曲線
圖4鹽度對S03株和S07株生長影響的生長曲線
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