紅霉素、慶大霉素和氧氟沙星3種藥物的時間-抑菌生長曲線分析
微生物比濁法能直觀地反應(yīng)抗生素總的抗菌能力，因此利用該原理，本文選擇了慶大霉素、紅霉素、氧氟沙星3種不同類型的藥物，實(shí)時測定并繪制時間-吸光度抑菌生長曲線，以此分析3種藥物在不同濃度下、不同時間節(jié)點(diǎn)上與細(xì)菌相互作用的關(guān)系，旨在為藥效學(xué)的研究、解決細(xì)菌耐藥性及指導(dǎo)臨床合理使用抗生素提供數(shù)據(jù)和試驗參考。
微量稀釋法-藥物敏感性試驗測得的MIC結(jié)果與濁度法測得的結(jié)果無顯著差異，但濁度法試驗為實(shí)時吸光值信號采集，獲得的結(jié)果可能更接近實(shí)際的MIC值，而通過時間-吸光度曲線進(jìn)行MIC終點(diǎn)判讀則更直觀和準(zhǔn)確。
如圖1所示，3種藥物的分離菌株生長曲線都是前期呈不斷增長的趨勢，到后期明顯逐漸下降，而質(zhì)控菌株呈現(xiàn)增長的趨勢，下降趨勢不明顯；不論是分離菌株還是質(zhì)控菌株，呈現(xiàn)的生長曲線的1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC曲線下面積不同；1/8MIC先于1/4MIC進(jìn)入對數(shù)生長期，1/4MIC先于1/2MIC進(jìn)入對數(shù)生長期；紅霉素、慶大霉素的分離菌1/2MIC先于質(zhì)控菌1/2MIC進(jìn)入對數(shù)生長期；氧氟沙星為快速殺菌劑，其1/2MIC進(jìn)入對數(shù)生長期較紅霉素和慶大霉素早。紅霉素為時間依賴型抗生素，其抑菌時間比慶大霉素和氧氟沙星都要長。。
通過紅霉素、慶大霉素和氧氟沙星3種藥物的時間-抑菌生長曲線分析，可以發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌在亞抑菌濃度（1/2 MIC）的壓力下，其生長趨勢呈現(xiàn)了不同于理論設(shè)想的情況，可能并非是細(xì)菌抑制或殺死其生長量絕對值的一半。
3種抗菌藥物對金黃色葡萄球菌的MIC
圖1金黃色葡萄球菌在3種抗菌藥物作用下的時間-吸光度曲線
圖2質(zhì)控菌株ATCC29213在3種抗菌藥物作用下的時間-吸光度曲線
討論與結(jié)論
已有研究表明，亞抑菌濃度下細(xì)菌耐藥基因的水平傳播可能性增加，突變株數(shù)量大于野生株數(shù)量，還會形成生物膜，這些都可導(dǎo)致耐藥性的產(chǎn)生，而亞抑菌濃度的藥物壓力下，耐藥菌株還會被選擇性富集，因此亞抑菌濃度下細(xì)菌與藥物的作用關(guān)系很有研究價值[10-12]。不同藥物濃度下金黃色葡萄球菌進(jìn)入對數(shù)生長期的時間有顯著差異，高濃度藥物下的金黃色葡萄球菌進(jìn)入對數(shù)生長期較低濃度藥物有一定的延遲，目前還不明確金黃色葡萄球菌在亞抑菌濃度下是否會蓄積不同耐藥機(jī)制的耐藥菌株，即藥物壓力下快速進(jìn)入對數(shù)期的細(xì)菌可能為獲得耐藥性的細(xì)菌。但也有研究證實(shí)，發(fā)生突變的高水平耐藥菌的適應(yīng)性與其親本株相比大多數(shù)出現(xiàn)適應(yīng)性下降[13]；耐藥金黃色葡萄球菌的生長曲線呈現(xiàn)先增長后減小的趨勢；濁度法下的時間-抑菌生長曲線可清楚地對不同依賴型藥物的抑菌殺菌時間進(jìn)行可視化判定，慶大霉素、氧氟沙星為濃度依賴型，可見不同藥物濃度對細(xì)菌生長繁殖影響較大，而紅霉素為時間依賴型，隨著時間的延長，不同藥物濃度的抑菌時間均比慶大霉素、氧氟沙星長，提示時間依賴型藥物的抑菌時間均比濃度依賴型藥物長。
濁度法較微量稀釋法比較具有5點(diǎn)優(yōu)勢：（1）濁度法可以進(jìn)行實(shí)時監(jiān)控，測定其實(shí)時吸光值，反映金黃色葡萄球菌生長的動態(tài)趨勢，微量稀釋法只能在第2 d觀察結(jié)果；（2）濁度法可以使用現(xiàn)有的濁度分析儀，實(shí)現(xiàn)自動化數(shù)據(jù)采集；（3）濁度法結(jié)合振搖培養(yǎng)，保證了藥物與細(xì)菌的充分作用；（4）濁度法終點(diǎn)判讀時更直觀；（5）濁度法可清楚地對不同依賴型藥物的抑菌殺菌時間進(jìn)行可視化判定。
通過紅霉素、慶大霉素和氧氟沙星3種藥物的時間-抑菌生長曲線分析，金黃色葡萄球菌在亞抑菌濃度（1/2 MIC）的壓力下，可能并非是細(xì)菌抑制或殺死其生長量絕對值的一半；不同藥物濃度下金黃色葡萄球菌進(jìn)入對數(shù)生長期的時間有顯著差異，高濃度藥物下的金黃色葡萄球菌進(jìn)入對數(shù)生長期較低濃度藥物有一定的延遲；耐藥金黃色葡萄球菌的生長曲線呈現(xiàn)先增長后減小的趨勢；隨著時間的延長，不同藥物濃度的紅霉素抑菌時間均比慶大霉素、氧氟沙星長。
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