恒河猴肺中陰溝腸桿菌的分離鑒定及藥物敏感性試驗——結(jié)果、討論
2、結(jié)果
2.1菌落特性
細菌經(jīng)培養(yǎng)在SS培養(yǎng)基上生長成濕潤、表面光滑、白色或乳白色、不透明的圓形菌落(如圖2A)，革蘭氏染色鏡檢，可見革蘭氏陰性小桿菌(如圖2B)。
圖2恒河猴肺組織分離菌菌落及菌體形態(tài)
2.2生化特性
三糖鐵培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，該菌產(chǎn)酸產(chǎn)氣。將ID 32E鑒定卡反應(yīng)結(jié)果編號輸入ATB鑒定系統(tǒng)，判定該細菌為陰溝腸桿菌，ID為99.9%，T為0.71，ID編碼35074753311，生化結(jié)果見表2。
2.3藥物敏感性試驗
陰溝腸桿菌藥敏試驗測得的抑菌圈直徑大小見表3。從表中可看出該菌對氨芐西林、頭孢呋辛中等敏感;對諾氟沙星、阿米卡星、慶大霉素、頭孢曲松、頭孢哌酮、頭孢噻肟敏感。
表3陰溝腸桿菌藥敏試驗結(jié)果
圖3恒河猴肺組織病理改變(HE染色，×100)
2.4病理結(jié)果
肺部病變明顯部位制作病理切片，鏡檢可見肺內(nèi)炎性肉芽腫形成(圖3A)，泡沫細胞聚集，血管支氣管周圍淋巴細胞浸潤(圖3B)。
表2細菌生化特性檢測結(jié)果
2.5小鼠致病性試驗
實驗組小鼠于接種菌液后5 h出現(xiàn)活動減少、精神萎靡、閉目、呼吸急促等臨床表現(xiàn)，19 h內(nèi)全部死亡，解剖可見肺葉出血、胃腸鼓氣、十二指腸腸壁變薄等病變(如圖4A、4B)。取病變肺臟組織進行細菌培養(yǎng)，分離出陰溝腸桿菌，表明該株陰溝腸桿菌對小鼠有較強的致病性。對照組小鼠行為表現(xiàn)及剖檢情況均正常(如圖4C)。
3討論
陰溝腸桿菌屬腸桿菌科腸桿菌屬，是條件致病菌，通常在人和動物的腸道內(nèi)寄生。如朱旗等發(fā)現(xiàn)在賽馬腸道菌群中存在陰溝腸桿菌，黃小蘭等從圈養(yǎng)滇金絲猴糞便中分離到陰溝腸桿菌。近年來陰溝腸桿菌備受關(guān)注是因為其引發(fā)的呼吸系統(tǒng)感染疾病日益增多。大量研究表明，某些嚴重的基礎(chǔ)疾病如燒傷、手術(shù)創(chuàng)傷、惡性腫瘤等，以及實施氣管切開、導(dǎo)尿、靜脈插管等侵入性診療操作，都能破壞機體免疫屏障結(jié)構(gòu)，造成免疫功能降低;另外激素等免疫抑制劑、化療藥物、抗生素的大量應(yīng)用及不適當?shù)穆?lián)合用藥抑制了正常菌群，使機體內(nèi)的正常菌群大量減少，導(dǎo)致陰溝腸桿菌等條件致病菌增多并大量繁殖成為優(yōu)勢菌種，并定位移植到腸外的其他器官系統(tǒng)，感染部位主要是下呼吸道和泌尿道。目前，對人類由陰溝腸桿菌引起的疾病研究較多，動物方面也較常見。如陰溝腸桿菌引起呼吸系統(tǒng)疾病的報道，包扣大熊貓呼吸道、七彩山雞肺臟、亞洲黑熊肺臟、綿羊肺部、牛肺臟感染;另有陰溝腸桿菌引起孔雀胚死亡、羅氏沼蝦幼蝦死亡、與馬鏈球菌獸疫亞種混合感染引起的馬出血性敗血癥等報道。但未見恒河猴感染的有關(guān)報道。
本文中該恒河猴由治療室轉(zhuǎn)出后突然死亡，可能是由于治療室與飼養(yǎng)大籠溫差較大，且突然改變環(huán)境引起的。病理變化主要為呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)，與由陰溝腸桿菌單獨感染引起的綿羊肺炎的病理變化，如肺尖葉、心葉、隔葉呈不同程度的出血、充血及肝變，消化道表現(xiàn)為輕重不同的卡他性和出血性炎癥變化基本一致。恒河猴腹瀉及肺炎是常見病與多發(fā)病，嚴重者導(dǎo)致死亡。本文從死亡恒河猴肺中分離到陰溝腸桿菌，這可能與恒河猴腹瀉時抵抗力下降以及不適當?shù)氖褂脧V譜抗菌藥物，致使恒河猴體內(nèi)菌群失調(diào)，導(dǎo)致陰溝腸桿菌從消化道移位到呼吸系統(tǒng)有關(guān)。另外也可能與院內(nèi)獲得性感染有關(guān)，隨著住院時間的延長，恒河猴與病原微生物接觸的機會增加，危重情況下更易感染陰溝腸桿菌。因此入院后應(yīng)隔離治療，避免交叉感染。
陰溝腸桿菌與銅綠假單胞菌、鮑曼氏不動桿菌、肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌是引起下呼吸道感染的主要革蘭陰性腸桿菌。陰溝腸桿菌的耐藥機制較為復(fù)雜，包括作用靶點的改變、主動外排活躍和外膜蛋白缺失、整合子、qnr基因介導(dǎo)、產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶等，其中產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶是腸桿菌科細菌最主要的耐藥機制。長期使用大量的抗菌藥物會引起細菌耐藥和交叉耐藥，造成臨床治療失敗，使臨床感染治療面臨潛在威脅。
本研究中陰溝腸桿菌對8種所試抗菌藥物均敏感，未出現(xiàn)耐藥的情況，這可能與治療時間較短有關(guān)系。在我國獸醫(yī)臨床治療過程中，濫用抗菌藥物的現(xiàn)象極為普遍，僅憑經(jīng)驗長期大量的使用廣譜抗菌藥物會引起動物體內(nèi)菌群失調(diào)，導(dǎo)致陰溝腸桿菌感染及耐藥性的產(chǎn)生。因此在實際工作中，為了有效控制該菌所致的各種感染，要做到以下幾點:首先，采取有效的隔離措施，及時、正確治療嚴重的基礎(chǔ)疾病，做到早發(fā)現(xiàn)早隔離早治療;其次避免或縮短侵入性操作，降低陰溝腸桿菌侵入性感染的機率;同時加強抗菌藥物的流通管理工作，根據(jù)藥敏試驗選用抗菌藥物，合理使用抗生素和激素，減少陰溝腸桿菌耐藥性的產(chǎn)生;最后做到徹底消毒滅菌，避免陰溝腸桿菌的散播。
本研究中，從死亡恒河猴肺中分離到陰溝腸桿菌，該株陰溝腸桿菌對小鼠具有較強的致病性。藥敏試驗結(jié)果表明陰溝腸桿菌對頭孢哌酮、頭孢噻肟最敏感，這為今后發(fā)現(xiàn)相同疾病的臨床治療工作提供一定的理論依據(jù)。